歐際醫藥依托擁有實驗動物使用許可證的實驗動物中心進行合作，為您提供主要包括模型制備、受試物給藥、標本采集、功能指標檢測等技術服務。

服務目錄號：#OGF-003

服務項目：輔助改善記憶功能評價

服務內容：

1.跳臺實驗、避暗實驗、穿梭箱實驗（雙向回避實驗）、水迷宮實驗（任選其一）

2.選用雄近交系小鼠，斷乳鼠或成年鼠（18－22g），用于改善老年人記憶的產品必須采用成年鼠，雌雄均可，單一性別，每組10－15 只。

3.實驗設三個劑量組和一個陰性對照組，以人體推薦量的10 倍為其中的一個劑量組，另設二個劑量組，必要時設陽性對照組。受試樣品給予時間30 天，必要時可延長至45天。

4.結果判定：跳臺實驗、避暗實驗、穿梭箱實驗、水迷宮實驗四項實驗中任二項實驗結果陽性。且重復實驗結果一致（所重復的同一項實驗兩次結果均為陽性），可以判定該受試樣品輔助改善記憶動物實驗結果陽性。

客戶提供：受試樣品、陽性對照品

歐際提交：詳細研究報告

服務周期：3個月

服務目錄號：#OGF-003-1

模型名稱：跳臺實驗

原理：反應箱底鋪有通36v 電的銅柵，動物受到電擊，其正常反應是跳上箱內絕緣的平臺以避免傷害性刺激。多數動物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺，如此訓練5min，并記錄每鼠受到電擊的次數或叫錯誤次數，以此作為學習成績。24h 或 48h 重作測驗，此即記憶保持測驗。記錄受電擊的動物數、第一次跳下平臺的潛伏期和3min 內的錯誤總數。停止訓練 5 天后（也可以在訓練后的一周、兩周或其它時間點）進行記憶消退實驗。

受試樣品對正常小鼠記憶的影響：末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開始訓練。將動物放入反應箱內（臺上、臺下）適應環境 3min，然后將動物放置反應箱內的銅柵上，立即通以36v 的交流電。動物受到電擊，其正常反應是跳回平臺（絕緣體），以躲避傷害性刺激。多數動物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺上。訓練一次后，將動物放在反應箱內的平臺上，記錄5min 內各鼠跳下平臺的錯誤次數和第一次跳下平臺的潛伏期，以此作為學習成績。24 或 48h 后進行重測驗，將小鼠放在平臺上，記錄各鼠第一次跳下平臺的潛伏期、各鼠 3min 內電擊次數和受電擊的動物數總數，同時計算出現錯誤反應的動物的百分率（受電擊的動物數占該組動物總數的百分率）。停止訓練5 天后（包括第 5 天）可以在不同的時間進行一次或多次記憶消退實驗（方法同重測驗）。

受試樣品對記憶障礙模型小鼠的影響：

造模：記憶獲得障礙模型制造：訓練前10min 腹腔注射樟柳堿或東莨菪堿 5mg/kg BW；

記憶鞏固障礙模型制造：訓練前10min 腹腔注射環已酰亞胺 120mg/kg BW；

記憶再現障礙模型制造：重測驗前30min 灌胃 30%的乙醇 10mL/kg BW。

數據處理及結果判定：潛伏期結果為計量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F 值<F0.05，結論：各組均數間差異無顯著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求后，用轉換后的數據進行統計；若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。

錯誤次數和3min 內跳下平臺的動物數均為記數資料，可用c²檢驗，四格表總例數小于40，或總例數等于或大于40 但出現理論數等于或小于1時，應改用確切概率法。

若受試樣品組與對照組比較，潛伏期明顯延長，錯誤次數或跳下平臺的動物數明顯少于對照組，差異有顯著性，以上三項指標中，任一項指標陽性，均可判定該項實驗陽性。

服務目錄號：#OGF-003-2

模型名稱：避暗法實驗

原理：利用小鼠嗜暗的習性設計一個裝置，一半是暗室，一半是明室，中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵，并與一計時器相連，計時器可自動記錄潛伏期的時間。小鼠進入暗室即受到電擊，計時自動停止。

儀器和試劑：避暗儀：該裝置分明暗兩室。明室大小為12cm×4.5cm，其上方約 20cm 處懸一 40w 鎢燈絲。暗室較大，大小為17cm×4.5cm，兩室之間有一直徑約 3cm 的圓洞。兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部中間位置的銅柵可以通電，電擊強度可在一旋鈕上任意選擇。一般采用40v 電壓。暗室與一計時器相連，計時器可自動記錄潛伏期的時間。

試劑：樟柳堿、東莨菪堿、環己酰亞胺、乙醇。

受試樣品對正常小鼠記憶的影響：末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開始訓練。實驗時將小鼠面部背向洞口放入明室，同時啟動計時器。動物穿過洞口進入暗室受到電擊，計時器自動停止，取出小鼠，記錄每鼠從放入明室至進入暗室遭電擊所需的時間，此即潛伏期，訓練5min，并記錄 5min 內電擊次數。24h 或 48h 后重作測驗，記錄每只動物進入暗室的潛伏期和5min 內的電擊次數，并計算 5min 內進入暗室（錯誤反應）的動物百分率。停止訓練 5 天后可以在不同的時間進行一次或多次記憶消退實驗。

數據處理及結果判定：潛伏期時間為計量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F 值<F0.05，結論：各組均數間差異無顯著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求后，用轉換后的數據進行統計；若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。5min 內進入暗室的次數和 5min 內進入暗室的動物數均為計數資料，可用c2檢驗，四格表總例數小于 40，或總例數等于或大于40 但出現理論數等于或小于 1 時，應改用確切概率法。若受試樣品組小鼠進入暗室的潛伏期明顯長于對照組，5min 內進入暗室的錯誤次數或 5min 內進入暗室的動物數少于對照組，且差異有顯著性，以上三項指標中任一項指標陽性，均可判定該項實驗陽性。

服務目錄號：#OGF-003-3

模型名稱：穿梭箱實驗（雙向回避實驗）

儀器與試劑：儀器：大鼠穿梭箱。該裝置由實驗箱和自動記錄打印裝置組成。實驗箱大小為50cm×16cm×18cm。箱底部格柵為可以通電的不銹鋼棒，箱底中央部有一高1.2cm 擋板，將箱底部分隔成左右兩側。實驗箱頂部有光源和蜂鳴音控制器，自動記錄打印裝置可連續自動記錄動物對電刺激（燈光或/和蜂鳴器）的反應和潛伏期，并將結果打印出來。

試劑：樟柳堿，東莨菪堿，環已酰亞胺，乙醇

受試樣品對正常大鼠條件反射建立的影響：末次給樣后次日（或一次給樣后1h）開始訓練。將大鼠放入箱內任何一側，20s 后開始呈現燈光或蜂鳴音，持續20s，后 10s 內同時給以電刺激（100V，0.2mA，50Hz，AC）。大鼠在遭電擊后即逃避，必須跑到對側頂端，擋住光電管后才可中斷電擊，此為被動回避反應，在每次電擊前給予條件刺激，反復強化后，大鼠在接受條件刺激后即跳向對側并擋住光電管而逃避電擊，此為主動回避反應，每隔天訓練一回，每回50次，連續訓練4－5 回后，動物的主動回避反應率可達 80－90%以上。根據打印結果分析如下指標：動物反應次數，動物主動回避時間，動物被動回避時間，動物主動回避率。停止訓練5－50 天內，分 2－3 次測定其記憶消退情況。

數據處理及結果判定：動物主動回避時間和被動回避時間為計量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F 值，F 值<F0.05，結論：各組均數間差異無顯著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求后，用轉換后的數據進行統計；若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。若實驗組主動和/或被動回避時間明顯短于對照組，差異有顯著性，可判定為該指標陽性。

服務目錄號：#OGF-003-3

模型名稱：水迷宮實驗

原理：動物都有一種“探索”和“更替”傾向，當離開一個臂時，總是跑向“久”未跑過的“新”臂。小鼠不愿在水中，因而尋找能爬出水面的階梯，訓練后，小鼠能記住找到階梯的路線。

儀器與試劑：水迷宮自動記錄儀。該儀器是由迷宮游泳箱和自動記錄儀兩部分組成。迷宮游泳箱由聚乙烯塑料制成，長100cm、寬 100cm、高 30cm；內徑長 90cm、寬 90cm、高 30cm，泳道寬 12cm，泳道走向固定。見附圖。

受試樣品對正常小鼠記憶的影響：連續給樣30 天，末次給樣次日開始訓練。訓練期間繼續給樣，每天一次。迷宮泳道水深 9cm，水溫約20℃（≮15℃）。將小鼠訓練時間限定為 2min，在 2min 內未到達終點的小鼠均記為 2min。第一次訓練前將小鼠放在梯子附近，使其自動爬上3 次。以后每次訓練前將小鼠放在梯子附近，背朝樓梯，使其自動爬上1 次。實驗分階段進行，視動物學習成績逐步加長路程。第一次訓練時用一擋板在 A 處檔死，從A 處開始訓練，記錄從 A 點到達終點的時間。第二次訓練加長路程，從 B 處開始，此路程約訓練 3

次，至動物數80%以上在 2min 內達到終點后再延長路程，分別記錄各鼠每次從 B 點到達終點所需的時間和發生錯誤的次數（進入任何一個盲端一次均算一次錯誤）。末次測試從起點進行，將小鼠放在起點，記錄從起點到達終點所需的時間和發生錯誤的次數。每次訓練時，對2min 內未達到終點的小鼠，應引導其到達終點，從終點的樓梯上來，達到訓練的目的。每次訓練或測驗時均將頭朝起始點。最后計算各組動物5 次訓練和測試的總錯誤次數，到達終點的總時間及2min 內到達終點的總動物數（百分率），停止訓練 5 天后可在不同的時間從起點進行消退實驗。

數據處理及結果判定：到達終點的時間屬計量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F 值，F 值<F0.05，結論：各組均數間差異無顯著性；F 值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求后，用轉換后的數據進行統計；若變量轉換后仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。錯誤次數和到達終點的動物數（百分率）兩指標為計數資料，可用χ²檢驗，四格表總例數小于40，或總

例數等于或大于40 但出現理論數等于或小于 1 時，應改用確切概率法。試驗組與對照組比，試驗組到達終點所用的時間或到達終點前的錯誤次數明顯少于對照組，或2min 內到達終點的動物數明顯多于對照組，且經統計學檢驗差異有顯著性。其中任一項指標為陽性，可判為該項實驗陽性。